QB 2394一2007 食品添加劑乳酸鏈球菌素
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QB 2394一2007.Food additive- Nisin.
5試驗方法
除非另有說明,在分析中儀使用確認(rèn)為分析純的試劑和GB/T 6682中規(guī)定的水。
5.1 感官擋標(biāo)
取適量樣品置于清潔、干燥的白瓷盤中,在自然光線下,觀察其色澤。
5.2鑒別
a胰凝乳蛋白酶對乳酸鏈球菌素具有專一性, 在乳酸鏈球菌素中加入a胰凝乳蛋白酶(根據(jù)酶活力而定),乳酸鏈球菌素活性立即消失。同時,乳酸鏈球菌素?zé)岱€(wěn)定性與其他蛋白相比具有特殊性,pH為2.0的乳酸鏈球菌素水懸液,121C、30min, 乳酸鏈球菌素仍不喪失活力。
5.3 效價
5.3.1試劑和溶液
a)乳酸鏈球菌素標(biāo)準(zhǔn)品(NisinA) ;
b)鹽酸溶液: 0.02mol/L;
c)吐溫20:水=1 : 1;
d)培養(yǎng)基(S|),配比如下,胰蛋白胨0.8%;酵母商0.5%;葡萄糖0.5%;氯化鈉0.5%;磷酸氫_鈉0.2%;瓊脂1 6%。
5.3.2分析步驟
5.3.2. 1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備
準(zhǔn)確稱取乳酸鏈球菌素標(biāo)準(zhǔn)品,溶于0.02mol/L鹽酸中,使*終濃度為2mg/mL,搖勻,用0.02mol/L鹽酸稀釋成300倍、600 信,即成高、低劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液。
5.3.2.2樣品溶液的配制
稱取一定量的樣品,用0.02mor/L鹽酸溶解后,稀釋成高、低劑量樣品溶液,其乳酸鏈菌素含量,按估計單位高、低劑量與標(biāo)準(zhǔn)品溶液大致相當(dāng)。
5.3.2.3菌 株懸浮液的制備
用接種環(huán)取環(huán)已培養(yǎng)好的檢測菌 (黃色微球菌,NCIB8166)置于6mL滅菌生理鹽水中,充分振蕩混勻,即成。加入培養(yǎng)基中的菌液量應(yīng)該達到6.0X 106個/mL。
5.3.2.4平板的制備
將S1培養(yǎng)基冷卻至約70C,加入2.0%吐溫浴液(吐溫20:水=1: 1)充分混勻,等冷卻至50C,加入6mL菌株懸浮液,混勻后小心倒入已水平放置的平板上,等凝固后,放置潔凈工作臺內(nèi)約1h,置4C冰箱存放到次田使用,使用前用打孔器在平板上打出所需的孔數(shù),小心棄去孔中的瓊脂塊。
5.3.2.5滴加溶液
用取樣器向瓊脂孔中滴加等量的高、低劑量標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液。
5.3.2.6恒溫培養(yǎng).
(QB 2394一2007 食品添加劑乳酸鏈球菌素標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容僅部分展示)
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